استخراج DNA از گونه های ماکرو جلبکی حاوی میزان بالای ترکیبات پلی ساکاریدی و فنولی جهت مطالعات ژنتیکی
|
کیانا پیریان، خسرو پیری، سعید تمدنی جهرمی، جلوه سهرابی پور، امیر اقبال خواجه رحیمی |
دانشگاه بوعلی سینا، همدان |
|
چکیده: (4230 مشاهده) |
استخراج DNA خالص و کافی از ماکرو جلبکها به علت دارا بودن رنج وسیعی از متابولیتهای ثانویه، نحوه اشتباه نمونهبرداری و خصوصیات مرفولوژی کی آنها، معمولاً مشکل است. ازآنجاکه استخراج DNA خالص جهت مطالعات مولکولی از اهمیت ویژهای برخوردار است این مطالعه باهدف استخراج آسان و ارزان DNA ژنومی باکیفیت و کمیت بالا از نمونههای ماکرو جلبکی انجام شد. استخراج DNA توسط روشهای فنول-کلروفرم، CTAB و CTAB تغییریافته انجام شد و همچنین نیتروژن مایع جهت خرد کردن نمونهها حذف گردید. درروش CTAB تغییریافته، تغییراتی در نسبت حجم بافر استخراج به نمونه، ترکیبات بافر استخراج (افزایش غلظت EDTA، بتامرکاپتواتانول و افزودن PVP و سارکوسیل) ایجاد شد. واکنش PCR بر اساس ژن tufA جهت اطمینان از خلوص DNA انجام شد. در ارزیابی کمی و کیفی DNA استخراجی، نسبت 280/260 نانومتر بین 84/1-7/1 و نسبت 230/260 نانومتر بیشتر از 2 نشان دادهشده و همچنین غلظت DNA بین 8-5/6 میکروگرم بر میکرو لیتر اندازهگیری شد. محصولات PCR باندهایی را در محدوده 700-800 جفت باز در ژل آگارز نشان دادند. ارزیابی کمی و کیفی دادهها، خلوص و میزان بالای DNA استخراجشده به روش CTAB تغییریافته نسبت به دو روش دیگر را نشان دادند، بهطوریکه نسبتها نشاندهنده عاری بودن DNA از ترکیبات پروتئینی و پلیفنولی/ پلیساکاریدی است. ازآنجاکه آلودگیهای پلیساکاریدی و فنولی بازدارنده آنزیمهای واکنش PCR هستند بنابراین نتایج موفقیتآمیز واکنش PCR نشاندهنده خلوص DNA استخراجشده و کاربرد آن در مطالعات مولکولی است.DNA استخراجشده به روش بهینهشده در این مطالعه مناسب جهت مطالعات مولکولی و نگهداری است. |
|
واژههای کلیدی: استخراج DNA، روش CTAB، ترکیبات پلی ساکارید و فنولی، ژن tufA، گونه های ماکروجلبک. |
|
متن کامل [PDF 385 kb]
(6482 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
شیلات دریافت: 1395/1/15 | پذیرش: 1395/1/15 | انتشار: 1395/1/15
|
|
|
|
|
ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|