Marine Biology

fa استخراج DNA از گونه های ماکرو جلبکی حاوی میزان بالای ترکیبات پلی ساکاریدی و فنولی جهت مطالعات ژنتیکی DNA Extraction from macroalgaespecies with high levels of polysaccharide and phenolic components for genetic studies شیلات Fisheries پژوهشي Research استخراج DNA خالص و کافی از ماکرو جلبک‌ها به علت دارا بودن رنج وسیعی از متابولیتهای ثانویه، نحوه اشتباه نمونهبرداری و خصوصیات مرفولوژی کی آن‌ها، معمولاً مشکل است. ازآنجاکه استخراج DNA خالص جهت مطالعات مولکولی از اهمیت ویژهای برخوردار است این مطالعه باهدف استخراج آسان و ارزان DNA ژنومی باکیفیت و کمیت بالا از نمونههای ماکرو جلبکی انجام شد. استخراج DNA توسط روشهای فنول-کلروفرم، CTAB و CTAB تغییریافته انجام شد و همچنین نیتروژن مایع جهت خرد کردن نمونهها حذف گردید. درروش CTAB تغییریافته، تغییراتی در نسبت حجم بافر استخراج به نمونه، ترکیبات بافر استخراج (افزایش غلظت EDTA، بتامرکاپتواتانول و افزودن PVP و سارکوسیل) ایجاد شد. واکنش PCR بر اساس ژن tufA جهت اطمینان از خلوص DNA انجام شد. در ارزیابی کمی و کیفی DNA استخراجی، نسبت 280/260 نانومتر بین 84/1-7/1 و نسبت 230/260 نانومتر بیشتر از 2 نشان داده‌شده و همچنین غلظت DNA بین 8-5/6 میکروگرم بر میکرو لیتر اندازهگیری شد. محصولات PCR باندهایی را در محدوده 700-800 جفت باز در ژل آگارز نشان دادند. ارزیابی کمی و کیفی دادهها، خلوص و میزان بالای DNA استخراج‌شده به روش CTAB تغییریافته نسبت به دو روش دیگر را نشان دادند، به‌طوری‌که نسبتها نشاندهنده عاری بودن DNA از ترکیبات پروتئینی و پلیفنولی/ پلیساکاریدی است. ازآنجاکه آلودگیهای پلیساکاریدی و فنولی بازدارنده آنزیمهای واکنش PCR هستند بنابراین نتایج موفقیت‌آمیز واکنش PCR نشاندهنده خلوص DNA استخراج‌شده و کاربرد آن در مطالعات مولکولی است.DNA استخراج‌شده به روش بهینه‌شده در این مطالعه مناسب جهت مطالعات مولکولی و نگهداری است. Isolation of high quality and molecular weight DNA from macroalgae is usually compromised because ofexcessive contamination of secondary metabolites, disregard of the sampling conditions and their morphological properties. DNA extraction is an essential step for molecular analysis. The main objective of this study is to provide a simple and inexpensive method of isolation of pure DNA from dried blades of macroalgae.DNA extraction was performed usingCTAB, phenol-chloroform, and modified CTAB as well. Also exclude the use of liquid Nitrogen for grinding samples. The changes in our modified procedure are including: ratio of tissue to extraction buffer, optimization of extraction buffer components by increase the concentration of EDTA, b-Mercaptoethanol and adding of PVP and Sarkosyl. Also PCR reaction was performed based on tufA gene.Theratio of A260/A280 and A260/A230 (nm) were recorded between1.7 and 1.84and >2, respectively.Also the concentration of extracted DNA ranged from 6.5 to 8 mgmL-1.Clear band of PCR products were observed in agarose gel.Purity and high quantity of extracted DNA from modified CTAB method was excellent as evident by ratio result in compare with two other methods. Results also suggested that the preparations were sufficiently free of proteins and polyphenolics/polysaccharide compounds which is sufficient for molecular analysis. Polysaccharide and phenolic compound inhibit enzymes of PCR reaction,sosuccess of PCR amplifying confirmed the purity of the product and itsapplicationin molecular analysis. ExtractedDNA from our modified method is suitable in molecular study. استخراج DNA, روش CTAB, ترکیبات پلی ساکارید و فنولی, ژن tufA, گونه های ماکروجلبک. DNA extraction, CTAB method, Macroalgae, Polysaccharide components, tufA gene. 67 78 http://jmb.ahvaz.iau.ir/browse.php?a_code=A-10-384-2&slc_lang=fa&sid=1 کیانا پیریان 10031947532846003265 10031947532846003265 No دانشگاه بوعلی سینا، همدان خسرو پیری 10031947532846003266 10031947532846003266 Yes دانشگاه بوعلی سینا، همدان سعید تمدنی جهرمی 10031947532846003267 10031947532846003267 No پژوهشکده اکولوژی خلیج‌فارس و دریای عمان، بندرعباس جلوه سهرابی پور 10031947532846003268 10031947532846003268 No مرکز تحقیقات کشاورزی و منابع طبیعی هرمزگان، بندرعباس امیر اقبال خواجه رحیمی 10031947532846003269 10031947532846003269 No دانشگاه آزاد اسلامی، تهران